摘要：以短芒披碱草种子的成熟胚、下胚轴和幼叶为外植体,MS (Murashige and Skoog)为基本培养基,添加2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、NAA、6-BA和激动素(KT),进行愈伤组织的诱导,其中成熟胚的出愈率最高,达到86.7％.愈伤组织诱导的最适培养基为MS培养基,最佳的激素组合为2,4-D5.0mgL-1和Kinetin(KT)0.05mgL-1.不同外植体来源和不同激素组合及浓度将产生不同类型的愈伤组织,其中黄白色,颗粒状易脆裂的愈伤组织才能够再生植株,而水样无明显结构的愈伤组织则只能诱导生根,不能再生出植株.在愈伤组织的诱导和继代培养时,添加一定数量的水解酪氨酸,可以改善愈伤组织的质量,提高愈伤组织的分化能力.继代培养时间和光照对愈伤组织的分化有很大影响.从成熟胚诱导的愈伤组织分化能力最强,可以达到54％左右.最佳的分化培养基是1/2MS培养基添加0.01 mg·L-1KT,和1.5mg.L-12,4-D.分离出愈伤组织并继代培养6周,选择结构致密、颗粒状、黄白色的胚性愈伤组织,用pCAMBIA-1304质粒(T-DNA上携有潮霉素抗性基因和类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因)转化的农杆菌EHA10S对其进行浸染的.共培养后的愈伤组织转接到MS基本培养基,并添加1.5mg.L-12,4-D, 0.01 mg.L-1激动素和60 mg.L-1潮霉素,进行愈伤组织的分化和筛选.对分化形成的抗性植株进行PCR-southern blotting,和RT-PCR分析,获得了一批抗虫转基因新材料.转基因材料经抗虫饲喂实验,其蝗虫致死率达到23.7％,与非转化材料相比,杀虫效果显著.同时研究了愈伤组织类型及生理状态、农杆菌浸染液的浓度、共培养温度及时间和培养基成分等因素对农杆菌遗传转化的影响,通过对这些条件的优化,建立了农杆菌介导的短芒披碱草程序化转基因方案.
