产气荚膜梭菌a毒素基因的定点突变与表达

摘要

目的：选择可能影响α毒素生物活性的氨基酸相关碱基位点进行定点突变，构建α毒素基因的突变体并在大肠杆菌中表达。方法：利用PCR定点突变技术，进行68位组氨酸→亮氨酸的定点突变，构建了含α毒素突变基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)。结果：α毒素突变基因287位核苷酸由A→T，经酶切鉴定和序列测定证实，构建的重组质粒pXMCPA02含有α-毒素突变基因，且基因序列和阅读框架正确。重组菌株BL21(DE3)pLys(pXMCPA02)表达产物经SDS—PAGE分析，其表达量占菌体总蛋白相对含量的33．82％。结论：已成功构建了α毒素基因突变体，并实现了在重组大肠杆菌中的表达。