一株猪源1型呼肠孤病毒的分离及鉴定

摘要

通过在细胞培养液中添加胰酶的方法，从仔猪腹泻粪样中分离、纯化并鉴定了1株能在Vero细胞上稳定产生CPE，以细胞颗粒增多、肿胀、漂落为主要特征的猪源1型呼肠孤病毒SHR-A株。根据呼肠孤病毒的理化特性，设计了一系列实验，将病毒初步纯化，然后进行电镜观察、核酸提取、RNA电泳、RT-PCR、各病毒基因扩增和克隆测序等常规病毒学鉴定。SHR-A株S1基因的同源性分析和核苷酸系统发育进化树分析表明该病毒与哺乳动物呼肠孤病毒(MRV)血清1型的同源性较高，而与2和3血清型的同源性较低，因此初步判断该SHR-A株为血清1型，此为国内首次报导从猪体内分离到的血清1型的呼肠孤病毒。进一步分析发现，SHR-A的S1基因全长为1465bp，其3'-UTR为3型，其余部分则为1型，说明其S1基因是1型和3型的嵌合体，此结果认为MRV作为RNA病毒，基因重组极可能是除基因突变和基因重排以外的第三种病毒变异进化方式。