GFP标记的重组新城疫病毒HN基因乳酸菌表达载体的构建

摘要

目的：构建具有示踪作用的重组新城疫病毒(NDV)HN基因乳酸菌表达载体，以用于制备NDV HN重组乳酸菌，进而研究其抗结肠癌功能和机制。方法：提取病毒总RNA，以RT-PCR方法扩增NDV HN，克隆至GFP示踪的乳酸菌表达载体pW425et/gfp中，构建的重组体电转化至植物乳杆菌NC8中。结果：采用质粒、酶切及PCR鉴定显示NDv HN基因与乳酸菌表达载体正确重组。SDS-PAGE检测荧光显微镜下观察到发绿色荧光的重组乳酸菌，结果显示表达出约46kDa的条带，与HN蛋白已知大小相符。Westernblotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性抗体所识别，具有反应原性。结论：在乳酸菌中表达了有免疫活性的NDV HN基因，为制备NDV重组乳酸菌及其抗结肠癌作用研究奠定基础。