稳定表达RKIP对新城疫病毒复制的影响

摘要

为了研究RKIP对新城疫病毒(NDV)复制的影响，从鸡胚成纤维细胞中提取总RNA，采用RT-PCR方法扩增RKIP基因，将其克隆入真核表达载体pEGFP-N1中，经PCR、双酶切和测序鉴定，采用FuGENEHD法将阳性质粒转染Vero细胞，经G418筛选，有限稀释法获取单克隆细胞株，Western blot检测RKIP的表达。利用Real-time PCR测定病毒感染细胞后培养上清的病毒量。结果表明，成功构建鸡RKIP真核表达质粒；转染Vero细胞后经克隆化培养获得稳定表达鸡RKIP的细胞株Vero-RKIP；感染初期，NDV在Vero-RKIP上表现出了更强的复制能力。