陆地棉品种邯208农杆菌介导茎尖转化体系

摘要

以陆地棉邯208为材料，进行茎尖分生组织再生培养，采用农杆菌介导转化外源基因，研究固化剂、植物生长调节剂和抗生素筛选对茎尖生根和成苗的作用，以及菌液浓度、侵染时间、共培养温度、共培养时间对转化率的影响。结果表明，以phytagel为固化剂，0.1mg·L-1 6-BA+0.1mg·L-1 IAA最适于茎尖不定芽的诱导，1/2MSB+0.1mg·L-1 IAA + 0.1mg·L-1 NAA诱导生根效果最佳。在75mg·L-1 Kan筛选下，以OD600为0.9的农杆菌菌液侵染25 min，22℃共培养48h，外源基因的转化率最高。采用该转化体系将克隆的编码谷胱甘肽S-转移酶的抗黄萎病相关基因GhGST转化邯208，经PCR检测获得了转基因阳性植株。