细菌脂肪氧合酶在大肠杆菌中的分泌表达

摘要

脂肪氧合酶(Lipoxygenase,ECl.12.11.12,简称LOX)广泛存在于植物组织中,它是一种含非血红素铁的酶,专一性催化含有顺,顺-1,4-戊二烯单元的多不饱和脂肪酸(如,亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸等)的氧合作用,生成脂肪酸的氢过氧化物.这些过氧化合物可对面粉及鱼油等食品中的胡萝卜素进行漂白;对蛋白质、油、淀粉、植物纤维或它们的混合物进行交联;用于绿色香料、植物激素等的合成。因此，LOX具有广泛的市场需求。NCBI基因组数据库的比对结果表明，铜绿假单胞菌含有LOX基因。以铜绿假单胞菌基因组为模板，通过PCR技术扩增得到LOX基因，将该基因插入到大肠杆菌表达载体pET22b的NdeⅠ-HindⅢ位点，并转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)得到LOX重组菌。250 mL摇瓶发酵结果表明，20℃及1 mM IPTG诱导50 h，重组菌胞外最高酶活达32000 U/mL.3L罐发酵结果表明，在相同诱导条件下重组菌胞外最高酶活可达到30000 U/mL。以10%甘油为保护剂，经过硫酸钱沉淀、阴离子交换对蛋白进行纯化，得到电泳纯的脂肪氧合酶。