SFRP2基因重组腺病毒载体的构建与鉴定

摘要

目的：成功构建携带SFRP2基因的腺病毒载体.rn 方法：从pGBKT-SFRP2质粒中扩增人SFRP2基因,将SFRP2基因亚克隆至质粒穿梭载体pAd-Track-CMV.用脂质体转染法将重组腺病毒pAd-Track-PPARγ2-CMV和pAdEasy-1共转染293细胞,成功构建的重组腺病毒Ad-SFRP2,确定转染效率.原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,利用Ad-SFRP2感染该细胞.通过RT-PCR和Western Blot分别检测感染后人瘢痕成纤维细胞及对照组细胞中SFRP2基因mRNA和蛋白表达水平.rn 结果：RT-PCR检测结果显示腺病毒Ad-SFRP2的PCR产物约为904bp,SFRP2mRNA表达水平明显增高;用抗SFRP2多克隆抗体进行Western blot检测为阳性,感染的充足腺病毒载体在人瘢痕成纤维细胞中SFRP2蛋白有较高的稳定表达.rn 结论：成功构建含有人SFRP2基因的重组腺病毒Ad-SFRP2;它可有效提高人增生性瘢痕成纤维细胞中SFRP2基因的表达水平.