高迁移率族蛋白-1和钙粒蛋白在矽肺发病中的作用

摘要

目的：探讨高迁移率族蛋白-1(HMGB1)和钙粒蛋白(S100)在矽肺发病中的作用,为充分认识矽肺炎症的发生发展提供新的理论依据。材料与方法：制备矽肺模型:选C56BL/6小鼠48只,实验分6组,对照组、3、7、14、21、42天实验组,每组6只.行支气管切开术,暴露支气管,进行支气管染矽尘,染尘浓度为200mg/kg,用生理盐水配制.对照组注入生理盐水.在不同的观察时间,收集支气管盥洗液,1000rpm,4℃,离心10分钟,细胞沉淀用生理盐水悬浮,制成细胞悬液,将细胞悬液滴加在玻片上,自然干燥后,倒置显微镜下计数细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞,方法是计数200个细胞,计算炎症细胞占的百分比.上清液用于检测HMGB1、S100和肿瘤坏死因子-α.(TNF-α).肺组织标本采集、病理切片和RAGE检测:取右肺放入液氮,用考马斯亮蓝法提取蛋白,用Western blot检测RAGE,扫描仪扫描胶片结果,采用捷达801系列凝胶电泳图像分析系统对结果进行分析,然后计算待测蛋白与β-acting光密度(IOD)的比值,比较各组间IOD/β-actin的大小.左肺用福尔马林固定24h,去除肺气管、支气管和结缔组织,石蜡包埋,做厚度为5μ的病理切片,苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察肺组织的病理改变.结果：支气管盥洗液中细胞总数及炎性细胞计数结果显示:肺泡巨噬细胞(AM)和中性粒细胞在3天和21天时段表现最高,与7、14、42天时段比较有明显的统计学差异,P＜0.05,各时段的炎症细胞与对照组比较有明显的统计学意义,P＜0.01.HMGB1和S100的Elisa检测结果显示:3-21天染尘时段,随着染尘时间的延长,HMGB1和S100逐渐增高,且显示有明显的统计学差异,P＜0.05,42天时段有所降低.各观察时段与对照组比较,有明显的统计学差异,P＜0.01.TNF-α结果显示:在观察时间3-14天,TNF-α水平逐渐升高,21天开始降低,并持续到42天,但各观察时段与对照组比较都显示了不同程度的统计学差异.肺组织RAGE的Western blot检测结果显示:随着观察时间的延长,RAGE表达水平明显降低,与对照组比较,显示有不同程度的统计学差异.病理学结果显示:随着观察时段的延长,肺组织炎症逐渐加重,肺泡壁增厚,结构明显破坏,肺泡腔逐渐融合,肺组织炎症病灶增多,在42天时段形成了大量的纤维化,几乎看不清肺泡结构.结论：在矽肺发病过程中,HMGB1和S100与TNF-α相比分泌较晚,提示HMGB1和S100参与了矽肺晚期炎症的形成,其生物学效应的发挥不依赖RAGE受体.