嗜热嗜压古菌Pyrococcus yayanosii CH1遗传操作系统的建立

摘要

本文通过外源DNA诱导的方法,成功的分离到一株兼性嗜压突变株(CHlAl),同时构建了SimR元件用于超表达3-hydroxy-3-methylglutarylcoenzyme A(HMG-CoA)还原酶,赋予了CH1A1 simvastatin抗性.以simvastatin为筛选标记,通过同源重组策略,成功的中断了CH1A1 pyrF基因,获得了CH1A2尿嘧啶缺陷型宿主.此外,构建了含有[pyrF-SimR]元件的无标记筛选敲除载体,分别以simvastatin和5-氟乳清酸(5-FOA)为正反向筛选标记,可以对CH1A2的任何非必需基因进行敲除.进而成功构建了适用于CH1的遗传操作系统,对研究CH1环境适应性具有重要意义.