fMLP诱导中性粒细胞p38MAPK/ERK磷酸化活性变化及木犀草素的作用研究

摘要

目的:木犀草素为磷酸二酯酶4(PDE4)活性抑制剂,能升高细胞cAMP含量、抑制中性粒细胞与微血管内皮细胞的黏附,其分子机制与抑制中性粒细胞淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)表达有关.p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、胞外信号调控激酶(ERK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、Janus激酶(JAK)四条信号通路可参与细胞黏附分子的调控,研究表明cAMP参与了以上信号通路的调节.木犀草素是否通过升高细胞cAMP含量进而阻断以上信号通路而抑制黏附分子LFA-1的表达需深入研究,为进一步明确其抗炎的主要信号通路和临床应用提供依据. 方法:中性粒细胞的分离提取采用密度梯度离心法,p38MAPK、ERK、PI3K、JAK磷酸化活性检测采用westernblot技术. 结果:fMLP对中性粒细胞p38MAPK磷酸化活性有一定的诱导升高的作用,但无显著性变化(p＞0.05),fMLP在1min和5min可诱导ERK磷酸化活性显著升高的变化(p＜0.05);木犀草素对中性粒细胞p38MAPK磷酸化活性有一定的促进作用,但无显著性差异(p＞0.05);木犀草素可呈剂量依赖性抑制ERK磷酸化活性,其中0.1、0.5、5μM木犀草素可显著抑制ERK磷酸化活性(p＜0.01);未检测到PI3K、JAK磷酸化活性. 结论:fMLP对p38MAPK磷酸化活性没有诱导作用,木犀草素对p38MAPK磷酸化活性没有显著性影响;fMLP可诱导中性粒细胞ERK磷酸化活性而木犀草素可呈剂量依赖性抑制ERK磷酸化活性.