表达APECⅠ型菌毛的减毒鸡伤寒沙门氏菌重组疫苗的构建及免疫保护研究

摘要

本研究基于染色体-质粒平衡致死系统平台,利用PCR技术扩增出表达APECⅠ型菌毛的fim操纵子基因并将其插入至含asd基因的组成型表达载体pYA3342,构建重组表达载体pYA3342-fim,将重组质粒电转化至缺失编码天冬氨酸半醛脱氢酶的asd基因的减毒鸡伤寒沙门氏菌SG9RΔasd突变株,构建重组减毒鸡伤寒沙门氏菌活疫苗SG9RΔasd(pYA3342-fim).采用MSHA与MHRA试验、酵母细胞凝集试验及玻板凝集试验验证了重组菌Ⅰ型菌毛的表达.同时,对重组菌的生长特性、遗传稳定性及口服安全性等生物学特性进行了评定.通过口服免疫接种重组菌SG9RΔasd(pYA3342-fim)、空载体对照组SG9RΔasd(pYA3342)以及PBS空白对照组,利用APEC强毒株QD2、鸡沙门氏菌50336对免疫鸡群进行免疫效果测定试验.结果统计显示,APEC QD2毒力株攻毒的免疫组、空载体对照组及空白对照组的死亡率分别为40.0％、80.0％、60.0％,并且空载体对照组和PBS空白对照组鸡的心包,肝脏,脾脏,气囊等实质器官的散在的充血出血等炎症反应比免疫组更加严重;沙门氏菌菌株50336攻毒的免疫组、空载体对照组及空白对照组的死亡率分别为40.0％、60.0％、60.0％,载体对照组和PBS空白对照组鸡的心包,肠道及其粘膜充血出血等炎症反应比免疫组更加严重.本研究表明重组减毒鸡伤寒沙门氏菌SG9RΔasd(pYA3342-fim)对大肠杆菌病以及沙门氏菌病对于鸡群的感染均起到一定的免疫保护效果.