鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法建立及初步运用

摘要

为了检测猪伪狂犬病病毒感染的情况,并进行强弱毒的鉴别诊断,本研究建立了快速、简便、灵敏度高、特异性强的鉴别猪伪狂犬病病毒的双重PCR方法.研究中针对PRV gE基因和gB基因序列,分别设计了2对特异性引物,通过对退火温度(50～60°C,按照1°C递增)、引物浓度(0.2～1.4μL,依次增加0.2μL)的优化,结果表明双重PCR反应的最佳退火温度为56°C、最适引物添加量为1μL,建立了快速鉴别PRV的双重PCR检测方法,并进行了特异性和敏感性试验.特异性试验结果表明该方法可以扩增出PRV gE(316bp)和gB(432bp)长的目的片段,对PCV2、PTV、CSFV、PPV、PRRSV、大肠杆菌的DNA或cDNA均无扩增;敏感性试验结果表明,PRV gE和gB的最低核酸检出量分别为4.4×103和3.3×103拷贝/μL,与单一PCR方法的敏感性相近.应用该方法对广东、广西地区临床送检的56份组织样品进行检测,检测结果显示强毒感染阳性率为53.6％,阴性率为46.4％,未发现有弱毒感染.