柔嫩艾美耳球虫Sir2基因的注释、克隆与重组表达

摘要

沉默信息调节因子2(silent information regulator2,Sir2)在染色质沉默、基因调控、代谢调节和调节细胞寿命等一系列细胞生物活动过程中起重要作用,近年来被作为抗病原微生物药物靶标成为了研究的热点.本研究应用生物信息学和比较基因组学技术注释获得了鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)Sir2的基因序列,以注释的基因序列设计引物,以E.tenella第二代裂殖子cDNA文库为模板,利用PCR扩增获得了EtSir2ORF基因序列;并构建pET43a-EtSir2重组表达载体,进行原核表达.结果显示EtSir2ORF全长为909bp,编码一段全长为302个氨基酸的多肽片段,该融合蛋白产物经SDS-PAGE鉴定相对分子质量约为99ku,与预期分子质量一致.表明成功重组表达并纯化了EtSir2,为建立以EtSir2为靶点的抗球虫药物筛选奠定了基础.