柔嫩艾美耳球虫子孢子高表达新基因的克隆、表达及分析

摘要

为克隆和研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)新基因,本研究在所获得的ESTs序列的基础上,应用RACE技术克隆获得了1个在子孢子阶段高表达新基因的全长cDNA序列(GU553107),命名为ZB7-C11,该基因全长1439 bp,ORF为525 bp,编码174个氨基酸,预测表达蛋白的分子量约为18.7ku.Real-time PCR对E.tenella不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析显示,该基因在子孢子阶段的表达高于其它阶段.另外.将ZB7-C11克隆于pGEX-4T中构建重组质粒pGEX-4T-C11.转化大肠杆茵BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达6 h后其表达量最高,并且重组蛋白分子量约44.7 ku大部分以可溶性存在.Westernblot分析显示该重组蛋白可被抗E.tenella的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性.该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础.