可诱导剔除选择标记基因的pBLCK载体构建及验证

摘要

为了剔除冗余且有潜在安全问题的选择标记基因,本研究构建了一个新的可诱导剔除选择标记基因及重组酶基因的表达载体pBLCK.该载体含有Gateway组件,可进行外源目标基因的高效重组整合;具有NPTⅡ基因,利于转基因植株的筛选;具有可诱导剔除外源基因的CRE-GR组件,诱导抗性标记基因NPTⅡ和CRE-GR融合基因的剔除.该载体中上述元件都将在ubiquitin强启动子的控制下,可在农作物中组成型超量表达.本研究以TaWRKY71基因作为目的基因构建了71-pBLCK载体,转入拟南芥中,对选择标记基因剔除规律进行研究.结果表明,剔除选择标记基因分为完全剔除,部分剔除,未剔除3类,效率分别为29％、14％和57％.本研究为农作物转基因安全性研究提供了新的载体系统,具有一定的育种价值.