睾丸注射LV载体制备转基因小鼠研究

摘要

目的：探讨以精子介导法和慢病毒载体法相结合的方法建立转基因动物. 方法：用三质粒慢病毒载体系统和pSico-eGFP表达载体转染293TN细胞,包装慢病毒,转染后裂解细胞,收集携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒.将30uL含1x TransDux和1％台盼蓝的病毒液(2×107U/mL)注射到成年C57BL/6J小鼠睾丸网内,根据小鼠精子形成周期,分别于注射后7d、15d、30d和42d与发情母鼠合笼.利用EGFP观察灯检测转基因小鼠阳性率. 结果：该种方法能够制备转基因荧光小鼠,而且在注射后30d配种,产生的转基因小鼠阳性率最高,达35％. 结论：该方法操作简单,易于操作,能够有效制备转基因小鼠.