阿片δ受体激动剂增强心肌线粒体自噬减轻脓毒症心肌损伤

摘要

目的：观察δ阿片受体激动剂DADLE([D-Ala2,D-Leu5]-enkephalin)对脓毒症小鼠心肌的保护作用及生存率的影响,并探讨其与线粒体自噬的关系. 材料与方法：1.健康雄性C57BL/6J小鼠120只,随机分为4组(n=30),各组均注射注射致死剂量LPS18mg/kg,分别在注射LPS后立刻或4小时后于对侧腹腔注射DADLE5mg/kg或等量生理盐水,记录各组小鼠的死亡数.2.另取健康雄性C57BL/6J小鼠40只,随机分为5组(n=8).LPS(6h、12h、24h、36h)组分别腹腔注射LPS10mg/kg,空白对照组注射等量生理盐水.分别于相应时间点处死小鼠,JC-1染色测定线粒体膜电位(MMP)变化,Western Blot检测自噬蛋白LC3-Ⅱ、PINK1、Parkin表达水平.3.再取健康雄性C57BL/6J小鼠50只,随机分为5组(n=10).空白对照、LPS、LPS+DADLE、LPS+纳曲吲哚、LPS+纳曲吲哚+DADLE组,LPS各组腹腔注射LPS10mg/kg后立即于对侧腹腔注射DADLE5mg/kg,纳曲吲哚5mg/kg及DADLE5mg/kg+纳曲吲哚5mg/kg,空白对照组注射等量生理盐水.分别于注射LPS6h、12h后处死小鼠,留取血清测定cTnI水平,利用透射电镜观察心肌超微结构及自噬体形成,JC-1染色测定MMP变化,Western Blot检测自噬蛋白表达水平. 结果：1.小鼠注射致死剂量的LPS18mg/kg后立即或4h后给予DADLE可明显提高脓毒症小鼠的生存率.2.与对照组相比,LPS作用6h时MMP显著降低,随后逐渐上升;细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ在腹腔注射LPS12h明显升高,后逐渐下降;PINK1、Parkin在腹腔注射LPS6h明显升高,后逐渐下降.3.注射LPS后给予DADLE可明显降低血清cTnI水平,同时减轻LPS诱导的MMP下降,DADLE处理后的心肌超微结构观察明显好于LPS组.透射电镜下观察DADLE组的自噬体数量增加,且自噬蛋白表达水平明显增加.δ阿片受体拮抗剂纳曲吲哚可抵消其保护效应,且单独应用纳曲吲哚心肌损伤更加严重. 结论：1.脓毒症心肌损伤时心肌细胞及线粒体自噬水平升高,自噬应激可能更早发生于心肌线粒体.2.DADLE可能通过增强细胞及线粒体自噬保护心肌,提高脓毒症小鼠的生存率.