鉴别猪瘟和猪伪狂犬野毒与疫苗株5重PCR方法的建立

摘要

为配合猪场进行猪瘟与猪伪狂犬病的净化,建立一步法区分野毒与疫苗毒的多重PCR方法(mPCR),本实验通过参照GenBank中CSFV shimen株、弱毒疫苗C株等18株基因序列和PRV闽A株等10株相关基因序列并进行对比分析,并设计可区分猪瘟与猪伪狂犬野毒感染和疫苗毒株的2对特异性CSF引物和3对PR特异性引物.结果表明,本研究建立了鉴别猪瘟和猪伪狂犬野毒与疫苗毒株的5重PCR方法,该方法对PCV2、PRRSV、JEV和BVDV扩增结果均为阴性,表明特异性良好;敏感性结果表明,构建的5重PCR最低核酸检测量分别为6.2pg(CSFV野毒株)、21.3pg(CSFV-C株疫苗毒)、5.8pg(PR Guizhou-DY)、20.8pg(Bartha-K61)和8.6pg(SA215);采用该方法对134份可疑临床样品进行检测结果表明：CSF和PR疫苗毒与野毒在能繁母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪中的5重感染率分别为2.6％(1/38)、7.7％(2/26)、8.3％(3/36)和8.8％(3/34),实现了DNA病毒及RNA病毒的同步检测.该5重PCR方法的建立为从病原学方面快速鉴别CSF和PR疫苗毒与野毒提供了新的技术支撑,为规模化猪场实现猪瘟与猪伪狂犬的净化提供一种新方法.