重组白细胞介素4受体噬菌体单链抗体库构建及筛选

摘要

目的：应用噬菌体展示技术构建重组白细胞介素4受体(IL-4R)噬菌体单链抗体(scFv)库,并从抗体库中进行筛选. 方法：利用重组人IL-4R(rhIL-4R)蛋白免疫BALB/c小鼠,提取总RNA,反转录PCR扩增VH和VL基因,经重叠延伸PCR扩增出带有限制性酶切位点的scFv,用限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ分别双酶切scFv和pCANTAB5E载体,利用T4DNA连接酶进行连接,转入感受态细菌E.coli TG1中制备转化子;在培养基中培养得到噬菌体单链抗体库;通过3轮富集和筛选,选择抗原亲和力最强的克隆进行测序分析. 结果：经过3轮筛选,构建了库容为2×108的rhIL-4R单链抗体库,测序结果显示anti-rhIL-4R蛋白scFv基因全长741bp,编码247个氨基酸.通过VBASE2数据库分析,anti-rhIL-4R蛋白的VH和VL基因序列都存在3个互补决定区和4个骨架区. 结论：成功构建了抗rhIL-4R蛋白噬菌体scFv库.