HO-1逆转录急性单核细胞白血病THP-1细胞株耐药的作用及其机理研究

摘要

目的：体外建立对阿糖胞苷耐药白血病细胞株及敏感白血病细胞株,调控其血红素加氧酶-1(HO-1)的表达,证实HO-1逆转录耐药的作用,并探讨其耐药机制. 方法：采用阿糖胞苷浓度递增,间歇作用的方法诱导人白血病细胞系THP-1细胞对其产生耐药株,命名为THP-1/Ara,MTT法确定其耐药倍数,流式细胞仪检细胞周期和凋亡,采用hemin及znpp分别诱导及抑制THP-1、THP1/Ara的HO-1表达,实时荧光定量PCR和Western blot法检测HO-1、p13k、AKT、mTOR、P-AKT等相关耐药及通路基因和蛋白和凋亡相关基因bcl-2、bax在耐药及敏感细胞中的表达. 结果：成功建立阿糖胞苷耐药的人白血病细胞株THP-1/Ara,阿糖胞苷对THP-1和THP-1/Ara细胞的半数抑制浓度(IC50值)分别为1.25uM、45.2uM,THP-1/Ara细胞相对于THP-1细胞的耐药倍数为36.16倍.THP-1/Ara细胞中HO-1呈高表达,p13k、AKT、mTOR及其相应蛋白高表达,凋亡基因bcl2、bax呈低表达,下调HO-1后,耐药倍数明显下降,上述耐药基因呈低表达,凋亡基因呈相对高表达.同理,THP-1细胞株中,HO-1呈低表达,p13k、AKT、mTOR、P-AKT及其相应蛋白低高表达,凋亡基因呈高表达,上调HO-1表达后,耐药倍数显著上升,耐药基因呈高表达,凋亡基因表达下降. 结论：通过浓度递增法成功建立耐药细胞株THP-1/Ara,HO-1表达与p13k/AKT/mTOR呈正相关,下调HO-1表达具有逆转录耐药作用,其耐药机制与p13k/AKT/mTOR通路的激活相关.＞Bcl-2fBax表达量均有改变,提示天冬总皂苷很可能通过线粒体途径诱导HL60凋亡.