枯草芽孢杆菌NCD-2电击转化条件的优化

摘要

本实验主要针对可能影响NCD-2菌株转化的条件(如菌株的电场强度、电阻值和质粒类型)进行优化，以期获得NCD-2菌株的高效电击转化体系。通过设置不同的培养时间(3-4.5h)，不同电压(12.0-14.5 kV/cm)和不同电阻(200Ω,400Ω)。结果发现，NCD-2菌株按1:30比例转接到生长培养基中，37°C,150 rpm培养3.5 h，电场强度14.0 kV/cm，电阻200。的条件下，NCD-2菌株的电击转化效率最高(对质粒pNW33n的转化效率达到3.8x104转化子/pg DNA )。在优化条件下，又测试了5个不同大小并带有不同复制子的质粒对NCD-2菌株的转化效率，结果表明，不同质粒的转化效率依次为:pNW33n(4.21 kb, B. coagulans来源复制子)，pAD123 (5.95 kb, B.subtilis来源复制子)，pHY300PLK04.87 kb, Streptococcus faecalis来源复制子)，pMK3 (7.21 kb, Staphyloccocus aureus来源复制子)，pHV 1249 (9.09 kb, Staphyloccocus aureu来源复制子)。由此可见，影响质粒转化效率的主要因素是其所携带复制子的来源，其次可能是质粒的大小。