参元丹后处理对体外缺血/再灌注心肌细胞早期凋亡率的影响

摘要

目的：建立离体培养乳鼠心肌细胞体外缺血再灌注(I/R)模型,观察益气养阴、破血逐瘀法组方的中药参元丹后处理对心肌细胞凋亡率的影响并探讨其作用机制.方法：体外培养大鼠乳鼠原代心肌细胞,建立体外心肌细胞I/R模型,制备参元丹含药血清.大鼠随机分为2组,分别给予参元丹0.048g·ml-1及等量生理盐水,连续5d,最后一次给药后1h腹主动脉取血并分离血清,造模前将参元丹含药血清及空白血清分别稀释成5％参元丹含药血清、5％空白对照血清作为后处理药物.实验分:正常培养组、模型组、空白血清对照组、参元丹含药血清后处理组、参元丹含药血清后处理+LY294002组.采用倒置显微镜观察心肌细胞各时期形态学变化及搏动情况;采用免疫细胞化学方法对心肌细胞鉴定.Hoechst33342 染色检测心肌细胞的早期凋亡率.结果：心肌细胞鉴定显示心肌细胞阳性率≥95%，保证了实验的真实性和可靠性。与正常培养组相比，模型组心肌细胞早期凋亡率增高(P<0.01);与对照组及参元丹+LY组相比，参元丹组心肌细胞早期凋亡率降低(P<0.01);对照组与参元丹+LY组之间，心肌细胞早期凋亡率无明显变化(P>0.05)。结论：参元丹含药血清后处理能够降低体外心肌细胞I/R模型细胞凋亡率；参元丹含药血清减少心肌I/R损伤与激活PI3K途径有关。