一C型尼曼匹克病家系的基因诊断研究

摘要

目的：研究一个家族尼曼匹克病(Niemann-Pick's Disease,NPD)家系发病的分子遗传学基础及NPC1基因的突变情况,为遗传咨询提供新的资料.方法：收集该家族的临床资料和血液样本.取EDTA抗凝静脉血,采用标准酚氯仿法进行基因组DNA提取,并根据人类基因组设计合成NPC1基因包括25个外显子区域扩增产物,利用TD-G program进行扩增25个编码外显子及其侧翼内含子序列.扩增产物经过纯化、Bigdye染色后,直接进行正反向测序,采用软件分析测序结果,将测序结果与Genebank中的NPC1基因的正常序列进行对比,找出可能的致病突变,并对异常片段进行重新扩增测序,验证结果的可靠性.结果：患儿NPC1基因存在四个突变位点:c.3159G＞A(p.A1054T),是位于21号外显子内,导致1054位点的氨基酸由丙氨酸突变为苏氨酸;c.3824C＞T(p.L1275F),位于25号外显子内,导致1275位点的氨基酸由亮氨酸突变为苯丙氨酸;c.3466A＞G(p.N1156S),位于22号外显子内,导致位于1156位点的氨基酸由天冬氨酸突变为丝氨酸;c.3797G＞A(p.R1266Q),位于25号外显予内,导致位于1266位点的氨基酸由精氨酸突变为谷氨酰胺,此突变位点在正常人群中亦可出现,属于单核苷酸多态性(SNP);所有的突变均为杂合的错意突变,前两个突变位点遗传自其父亲、祖母,后两个突变位点遗传自其母亲,患儿祖父的NPC1基因未发现突变.