Smad3shRNA抑制TGFβ1对HSC-T6细胞活化的抗肝纤维化作用

摘要

目的:观察Smad3 shRNA对TGF β1作用于大鼠HSC—T6细胞增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化胶原的影响.方法:Smad3 shRNA慢病毒感染HSC—T6,应用流式细胞仪检测其感染率,Real—time PCR检测对Smad3 mRNA表达的抑制作用;将HSC-T6对照、HSC-T6+TGFβ1(10 ng/ml)、Smad3 shRNA以及Smad3 shRNA+TGFβ1(10 ng/ml)这4组细胞进行如下检测:(1)MTT检测细胞增殖;(2)流式细胞仪检测TGFβ1作用24、36 h细胞周期分布;(3)Real-time PCR检测24、36 h时细胞周期、增殖及肝纤维化相关基因mRNA的表达变化;(4)ELISA检测24、36 h培养液上清中胶原蛋白(COL)Ⅰ、COLⅢ及α-SMA的含量.结果:Smad3 shRNA慢病毒感染HSC-T6细胞至96h，感染率为71.3%，对Smad3mRNA的表达抑制率为50%.结论:Smad3 shRNA抑制了TGF β1对HSC-T6的活化，显示了抗肝纤维化作用。