猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达

摘要

目的: 克隆表达猪链球菌2型谷氨酸脱氢酶。方法: 设计1时引物，采用PCR方法以猪链球菌2型河南分离株PDSWG-1的基因组DNA为模板扩增出gdh全基因序列。用限制性核酸内切酶BamH I.Xhol进行双酶切后，将其定向克隆到pET32a(+)中，构建重组表达质粒pET32a-gdh，并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达。结果: 经1mmol/L IPTG诱导后SDS-PAGE分析表明，重组菌株表达出了约68.8KDa的融合蛋白条带，与预期一致。Westem blotting分析表明，该融合蛋白具有特异的生物学活性。结论: 这为以后建立快速简便特异的免疫学检测方法及制备单克隆抗体提供了较好的抗原，同时为研制猪链球菌亚单位疫苗和诊断试刺盒奠定了基础。