大鼠骨髓间充质干细胞对单个核细胞体外活化影响的研究

摘要

目的：研究大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对单个核细胞体外活化增殖的免疫调节作用，并初步探讨MSCs的免疫调节机制。 方法：从大鼠骨髓中分离培养间充质干细胞，通过瑞氏-姬姆萨染色进行形态学观察，应用流式细胞术检测以鉴定其细胞表面特征。以刀豆蛋白A(ConA)为刺激源，用MTT法测定单个核细胞(mononuclearcell，MNC)增殖指数，检测不同数量(1×104、2×104、8×104)MSCs在加入或不加入TGF-β1中和抗体的情况下对MNC增殖指数的影响。用Rt-PCR技术和ELISA技术分别检测MSCs的TGF-β1 mRNA的表达，以及72小时培养上清中TGF-β1的含量。用流式细胞技术分析单独培养或与MSCs共培养的MNC中CD4+CD25+T细胞比例的差异,并用Rt-PCR技术检测CD4+CD25+调节性T细胞的特异性标志Foxp3 mRNA表达量的差异。 结果：当MSCs数量为1×104、2×104、8×104时MNC的增殖指数同对照组相比明显降低，而且MSCs数量越多MNC的增殖指数下降越明显(P<0.05)，但在加入TGF-β1中和抗体的实验组增殖指数可部分恢复。Rt-PCR和ELISA实验结果显示，MSCs表达较高水平的TGF-β1。流式细胞结果显示，在MSCs存在的条件下，MNC中的CD4+CD25+T细胞亚群比例明显高于单独培养组(P<0.05)，且Foxp3 mRNA的表达量也明显高于单独培养组(P<0.05)。 结论：MSCs能够抑制ConA刺激的单个核细胞体外增殖，而且呈数量依赖性。这种抑制作用至少部分是通过分泌TGF-β1介导的，并与上调MNC中CD4+CD25+调节性T细胞比例有关。这可以部分解释MSCs对移植物抗宿主病(graft versus hostdisease,GVHD)以及自身免疫病的免疫调节作用，因此，本实验通过初步研究MSCs的免疫调节机制，为MSCs的临床应用提供了一定的科学依据。