猪瘟病毒环介导等温扩增(RT—LAMP)快速检测方法的建立和应用

摘要

本文利用环介导等温扩增技术(LAMP )，建立了检测猪瘟病毒(CSFV)的快速诊断方法。该方法针对CSFV 5'端保守基因成功设计了6条特异引物，经条件优化后，在63°C恒温条件下只需45min，就能很好的扩增CSFV目的片段。将CSFV和其它六株与猪瘟病毒相关的病毒进行RT-LAMP扩增，验证了该方法的特异性；RT-LAMP产物经XhoI酶酶切来确定产物的即为目的片段；RT-LAMP对CSFV的最低检测量为1×101个基因拷贝，是RT-PCR敏感度的100倍；用CSFV RT-LAMP法和RT-PCR检测方法分别对27分临床样本进行检测，结果证明CSFV RT-LAMP在检测CSFV的快速、敏感和特异方面更加可靠和方便。