不同途径移植自体激活雪旺细胞修复大鼠脊髓损伤

摘要

目的：通过不同途径移植自体激活雪旺细胞(autologous activated Schwann cells, AASCs),初步评价各种移植途径在修复大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)中的作用和疗效.方法：结扎Wistar成鼠双侧隐神经,一周后取下结扎处远端神经,在体外分离,培养,传代,纯化和鉴定后获得供实验用的AASCs.60只雌性Wistar大鼠用NYUImpactor-II打击器建立T10脊髓损伤模型后随机分为三组,每组20只,造模成功一周后将预先用Hoechst33342标记的AASCs分三种途径分别移植到上述三组大鼠体内:groupI:尾静脉移植.groupII:鞘内移植(经蛛网膜下腔).groupIII:局部损伤处移植.术后采用BBB评分对大鼠行为的功能恢复进行评价.3个月后,进行10％BDA皮质脊髓束(corticospinal tract,CST)顺行示踪标记,标记2周后处死动物,取出损伤处脊髓行10μm快速冰冻切片后,行Cy3荧光探针染色,NF200和HE染色.结果：AASCs在体外可稳定传4代以上并表达s-100抗原.从术后第4周开始,BBB评分在各组间差异具有统计学意义(p＜0.05). 至实验结束时,HE染色显示groupIII中损伤空洞明显小于其余两组,NF200免疫组化染色阳性面积占总面积百分比各组间差异具有统计学意义(p＜0.05).BDA神经示踪显示,groupIII中有较多的再生轴突通过脊髓损伤区,横断面上再生轴突的免疫组化阳性面积各组间差异有统计学意义(p＜0.05).结论：局部损伤处移植AASCs可以有效的保证移植细胞的数量,AASCs通过分泌多种营养因子和桥接损伤轴突再生的作用促进大鼠脊髓损伤后的功能恢复.