虎源流感病毒HA基因克隆、序列分析及其在重组杆状病毒中的表达

摘要

将虎源流感病毒A/Tiger/Harbin/01/2003(H5N1)HA基因克隆入pMD18T载体,得到pT-HA质粒,对pT-HA进行序列测定.结果表明:HA基因长为1731bp,读码框均由1707个碱基组成,编码568个氨基酸;HAB/01HA裂解位点含有由6个碱性氨基酸组成插入序列(RRRKKR),进化分析表明,HA基因均位于H5亚型欧亚谱系中国分支中.将pT-HA质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ分别用BamHⅠ及XhoⅠ酶切后,用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pFastBac-HA;再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-HA;将Bacmid-HA转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒,并进行表达水平的检测.经Western-blotting检测,HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达.用感染重组病毒的sf9细胞免疫小鼠,二免疫后2周可诱导小鼠产生1:4-1:16的血凝抑制抗体.