猪圆环病毒2型重组ORF2蛋白-ELISA诊断方法的建立及初步应用

摘要

根据猪圆环病毒2型(PCV2)GD株序列(AY613854),设计一对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pMD-ORF2为模板,扩增出含ORF2基因的3'端(576bp),回收PCR产物,将其克隆入pET-32a的BamHⅠ和HindⅢ位点间,构建重组质粒pETORF2,转化大肠杆菌Rosetta-gamuTM(DE3)进行融合表达,表达蛋白质主要以包涵体形式存在.用8mol/L尿素溶解包涵体后,利用镍离子金属螯合亲和层析法纯化蛋白,结果在SDS-PAGE上显示出一条约40ku的目的条带,纯度达到90％以上.以此纯化的表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,并对临床236份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为64.2％(152/236)。