应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法

摘要

根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计一对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709bp),回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定.重组质粒经BalI和SalI双酶切,回收OFR2基因,将其插入pGEX-KG的SmaI和SalI位点,构建原核表达质粒pGEXORF2,阳性重组质粒转化E.coli BL21(DE3),进行原核表达.用此表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,并对临床676份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为62.7﹪(424/676),仔猪阳性率为39.0﹪(74/190),肥猪阳性率为63.2﹪(84/133),母猪阳性率为74.6﹪(249/334),公猪阳性率为89.5﹪(17/19).