猪圆环病毒Ⅱ型GD株ORF1基因重组腺病毒的构建及其表达

摘要

根据PCV2ORF1基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF1基因(945bp).将此基因片段克隆入pMD18-T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD-ORF1.将PCV2ORF1基因克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-ORF1,将重组质粒与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF1,然后用PacI线性化后转染293细胞,在293细胞内包装出重组腺病毒.通过荧光显微镜观察、PCR检测和Westernblot检测证明PCV2ORF1基因在293细胞内获得表达,ORF1多肽具有一定的免疫原性。