PRRSV ORF3、ORF5串连基因重组腺病毒的构建

摘要

利用PCR分别扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF3基因和ORF5基因,按正确的读码框用串联的方式依次克隆入pMD18-T载体.经过酶切鉴定和测序证实无误后,酶切目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV.构建成功的重组穿梭质粒经酶切和测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒,穿梭质粒用PmeI线性化后可与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌(BJ5183)内进行同源重组,以产生重组腺病毒质粒.将PCR与PacI酶切鉴定的重组腺病毒质粒用PacI线性化后转染293细胞,在293细胞内包装成为完整的腺病毒,通过荧光显微镜观察、PCR可以确定ORF1基因和ORF2基因串连重组腺病毒构建成功。