miR-491-3p在MDR1介导的人肝癌多药耐药中的作用

摘要

目的:微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是非编码单链小RNA分子,可以负调控基因的表达.ABC药物转运体MDR1(Multidrug Resistance protein 1)是造成人肝癌多药耐药的主要原因之一,严重影响肝癌的治疗.本研究探讨了miR-491-3p在MDR1介导的人肝癌多药耐药中所起的作用.方法:使用Lipofectamine 2000转染试剂转染miR-491-3p模拟物(mimics)、阴性对照(negative control,NC)或含MDR1 3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)的重组质粒.使用实时定量PCR、蛋白印迹方法检测细胞和组织中的MDR1的mRNA、蛋白表达情况.使用双萤光素酶报告系统检测MDR1 3’UTR重组质粒萤光素酶表达情况.使用MTT 的方法检测化疗药物的细胞毒性.结果:与野生型小鼠相比,Dicer1敲除小鼠肝脏中MDR1mRNA与蛋白表达显著上调,提示可能有microRNAs参与了MDR1的表达调控.结合Targetscan和Microcosm两个网站的miRNAs预测结果,选出20个miRNAs 进行筛选试验.筛选结果显示miR-491-3p可显著下调Hep3B细胞中MDR1的表达.miR-491-3p与MDR1在多种人癌细胞中呈负相关性表达.进一步研究结果显示,miR-491-3p可显著降低MDR1 3’UTR萤光素酶的表达.化疗药物在转染miR-491-3p后的Hep3B细胞中的毒性显著增加.结论:miR-491-3p可直接作用于MDR1 3’UTR,进而负调控人肝癌细胞中MDR1的表达,从而提高化疗药物的细胞毒作用,这为抑制癌细胞多药耐药现象提供了可能的新型联合用药治疗方案.