我国云南登革4型病毒减毒株生物学特性和全基因组序列研究

摘要

目的：对两株登革4型病毒减毒株(Ban18 HK20和Ban18 HK30)的部分生物学特性进行研究,同时测定其全基因组序列并与母株(Ban18)序列比较,分析与毒力相关的位点.方法：将两株减毒株及其母株在Vero细胞传代后进行空斑形态、毒力和免疫原性的比较研究;提取上述三株病毒的基因组RNA,RT-PCR方法分段扩增其全基因组序列并测序,采用DNAStar软件包进行序列比对分析.结果：Ban18HK20株和Ban18 HK30株在Vero细胞上形成的空斑形态较其母株稍大且模糊.两株减毒株对9～11g小鼠的脑内lg(PFU/LD50)均＞4.5,而Ban18株的lg(PFU/LD50)为0.4,二者对2～4日龄乳鼠的致病力也明显低于其母株Ban18株.将三株病毒稀释到106PFU/mL腹腔免疫小鼠,两周后用登革4型国际标准株H241株进行脑内攻击,结果表明Ban18株和Ban18 HK20株对H241脑内攻击的保护指数约为100,而Ban18 HK30株对H241的脑内攻击基本没有保护作用.比较Ban18株及其减毒株的全基因组序列,结果表明Ban18株和Ban18 HK20株有8处核苷酸差异,其中3处引起氨基酸变化,C111、E155、E369和3’UTR219四个位点可能与毒力密切相关.结论：Ban18 HK20和Ban18 HK30毒力明显低于其母株,其中Ban18 HK20免疫原性较好,是一株有希望的登革4型病毒疫苗候选株;全基因组序列比对结果表明C111、E155、E369和3’UTR219可能与毒力密切相关.