抗NMDAR抗体的临床检测研究

摘要

本文旨在探讨抗NMDAR抗体在海马神经元上的作用位点,利用HEK293细胞转染表达NMDAR亚基的方法探寻抗NMDAR脑炎的临床检测方法.用实验组(临床确诊的抗NMDAR脑炎患者)与对照组(健康体检者或非感染免疫相关疾病患者)的血清和/或脑脊液分别孵育鼠海马神经元,采用单标记或双标记的免疫荧光方法,利用激光共聚焦显微镜观察抗NMDAR抗体在鼠海马神经元上的作用位点;将SD大鼠腹腔注射麻醉后,进行常规灌注固定,断头取脑,蔗糖沉淀,用冰冻切片机做连续冠状切片,后用实验组和对照组的血清和/或脑脊液分别孵育含海马结构的脑组织切片,观察实验组抗体作用结果;将表达NR1和NR2(A、B)的质粒以等分子浓度在合适条件下共转染至HEK293细胞,采用免疫荧光及Western Blotting的方法验证转染是否成功,然后用实验组和对照组的血清和/或脑脊液孵育表达NRl/NR2功能二聚体的HEK293细胞,采用免疫荧光方法观察是否存在抗原抗体反应,从而判断血清和/或脑脊液中是否存在抗NMDAR抗体;将该检测方法与国外已有的抗体检测方法对照,分析该检测方法的特异性和灵敏度.结果表明抗NMDAR脑炎患者血清和/或脑脊液中检测到抗NMDAR抗体对其诊断至关重要。抗NMDAR抗体主要作用于NRl/NR2功能二聚体，NRl胞外区是抗体结合的位点，HEK293细胞转染表达NMDAR亚基的方法是抗NMDAR脑炎临床检测的一种重要方法。