细胞表面展示脂肪酶工程菌的构建及全细胞酶活性分析

摘要

为提高餐厨垃圾生物强化堆肥过程中脂肪降解效率,构建了高温期脂肪酶基因工程菌.通过醋酸锂转化法,以pYD1为穿梭质粒,将密码子改造后的脂肪酶基因lip转入表面展示载体酿酒酵母EBY100,平板检测表明重组酶具有生物学活性,在诱导后48h活性较高.进一步酶学特性分析表明:该酶最适pH为8.0;最适反应温度为55℃;1M NaCl可以刺激酶活性增加,3.5M以下保持70％以上活性,表现出较强的耐盐特性;对乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基硫酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)具有较高抗性,对咪唑、尿素抗性相对较弱.综上,该重组酶具有耐盐、耐高温、耐碱的特性,且对抑制剂和变性剂具有普遍抗性,对高温、碱性环境适应力强,具有广阔的市场应用前景.