ANGPTL1在肿瘤细胞转移中的作用初探

摘要

ANGPTL1基因是ANGPTLs(血管生成素相关蛋白)家族的一个成员,它对血管发生、内皮细胞的保护及胚胎器官发生等方面有重要作用.为探究血管生成素相关蛋白1(ANGPTL1)在肿瘤转移进程中的作用机制,从人肝cDNA文库中经PCR扩增出ANGPLT1基因及其C端FD domain,经纯化、回收目的片段,将其插入克隆载体pcDNA3.1/His-Myc(-)B,构建ANGPTL1的过表达载体,转染肿瘤细胞,筛选阳性克隆,通过细胞划痕实验,粘附实验检测ANGPTL1对肿瘤细胞迁移能力的影响.进而通过pull down,CoIP结合质谱技术,以及激光共聚焦发现并验证ANGPTL1相互作用蛋白.在ANGPLT1过表达的肿瘤细胞株中，细胞的迁移能力减弱，粘附能力增强，提示ANGPLT1在介导细胞迁移和运动性中发挥重要作用。通过pull down寻找到与ANGPLT1相互作用蛋白MACF1(微管微丝交联因子)，并通过免疫共沉淀结合质谱鉴定以及免疫荧光共聚焦技术验证了ANGPLT1与MACF1间的相互作用。进一步机制研究将深入探讨ANGPTL1与MACF1相互作用可能在Wnt通路传递以及肿瘤EMT进程中的重要作用。