黄芪注射液对人恶性黑色素瘤细胞增殖及细胞周期的作用研究

摘要

目的:研究黄芪注射液对人恶性黑色素瘤A375细胞生长增殖情况和细胞周期的影响,探讨扶正中药黄芪治疗恶性黑色素瘤的作用机制.方法:采用细胞培养方法进行黑色素瘤A375细胞的培养,以黄芪注射液为研究用药,分为实验组(加入不同浓度的黄芪注射液)和对照组(加等量生理盐水),光学显微镜下观察实验组和对照组的黑色素瘤A375细胞的形态变化,初步判断黄芪注射液对A375细胞生长增殖情况的影响;利用MTT法比较实验组和对照组A375细胞的生长抑制率来研究黄芪注射液对A375细胞生长增殖情况的影响;利用流式细胞术检测黄芪注射液对黑色素瘤A375细胞周期的影响.结果:光学显微镜下观察发现不同剂量的黄芪注射液(50mg/mL、100mg/mL、200mg/mL、300mg/mL、400mg/mL、800mg/mL)对黑色素瘤A375细胞均有抑制作用,细胞生长状态明显较对照组差,且剂量越高A375细胞死亡的越多.MTT法分析结果显示,与对照组相比,黄芪注射液对A375细胞生长抑制作用明显,且呈时间和剂量依赖性.实验组分别用50、100、200、300、400、800mg/mL黄芪注射液处理24、48、72h后,A375细胞的生存率均随着黄芪注射液的浓度的升高逐渐下降,A375细胞的生长均受到不同程度的抑制;在不同剂量黄芪注射液处理过程中,发现处理72h后A375细胞生长抑制最为明显,细胞死亡较多;处理24h后,除最低剂量组A375细胞和对照组没有显著差别外,其他剂量组均出现不同程度的抑制,且具有统计学意义.流式细胞术分析表明,对照组G1期的比例是83.83％,S期的比例为12.59％,经过200、300、400mg/mL黄芪注射液处理48h后,G1期细胞比例分别为71.08％、62.12％、48A3％;S期细胞比例分别为21.61％、24A7％、3827％.由此可知,随着黄芪注射液浓度的增加,S期细胞的比例不断升高,G1期细胞比例逐渐下降,说明黄芪注射液对A375细胞周期的影响是呈剂量依赖性的.结论:利用黄芪注射液处理A375细胞后可以有效抑制A375细胞的生长和增殖,同时发现黄芪注射液抑制A375细胞增殖是通过将A375细胞阻滞在S期,抑制细胞的有丝分裂进程,从而抑制细胞增殖周期,导致细胞死亡.