柔嫩艾美耳球虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶生化特性的研究

摘要

本研究基于鸡球虫基因组信息,利用生物信息学注释、拼接E.tenella GAPD-H的基因序列；以E.Tenella第二代裂殖子总RNA为模板,运用RT-PCR技术扩增EtGAPDH基因序列,并进行体外重组表达；以响应曲面法分析温度及pH值对重组蛋白酶活性的影响,进行动力学分析.本研究成功克隆了EtGAPDH基因,并构建了重组表达质粒pET43 a-EtGA-PDH,Western blot分析表明已获得纯化的目的蛋白；经RSM分析rEtGAPDH的最适反应条件为34.6℃,pH7.1;对重组蛋白进行动力学分析结果显示,rEtGAPDH对glyceraledhydE-3-phosphate的Km=0.9619±0.1817 mM,Vmax=3.6162±0.3978 mmol/mg protein/min,对NAD+的Km=0.1164±0.0141 mM,Vmax=-4.3±0.2010 mmol/mg protein/min.本研究结果将为阐明EtGAPDH的功能,以及利用该靶标筛选新型抗球虫先导化合物奠定了基础.