柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶生化特性的研究

摘要

本研究应用电子克隆技术成功注释获得了柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶的基因序列,以E.Tenella广东株第二代裂殖子总RNA为模板,再利用RT-PCR技术扩增得到EtDHODH全长ORF序列.构建重组表达载体pCold Ⅰ-EtDHODH,转化到大肠杆菌Rosseta,通过IPTG 16℃低温诱导表达得到pCold Ⅰ-EtDHODH重组表达蛋白.以pCold Ⅰ-EtDHODH表达的重组蛋白进行酶动力学以及抑制动力学分析.本研究首次克隆了EtDHODH的基因,并且分析了重组蛋白的体外活性和生化特征,建立一个以EtDHODH为靶标的抑制物筛选模型,Leflunomide能够抑制EtDHODH的酶活性,看可以作为研发抗球虫药物的先导化合物.为E.tenella DHODH作为新型抗球虫药物研制的潜在靶标提供了理论和实验基础提示.