猪瘟病毒诱变型E2基因重组干酪乳杆菌的构建及免疫学特性

摘要

本研究将为益生菌株的改造及表达猪瘟E2蛋白的重组乳酸菌作为口服疫苗防治猪瘟奠定科学的基础。rn 以pET28a-E2重组质粒为模板，应用PCR扩增得到猪瘟病毒诱变E2基因，并纯化后连接到pNZ44质粒载体中，并通过酶切及测序分析正确，表明成功构建了插入目的基因片段的pNZ44-E2重组表达质粒。重组质粒电转化入已筛选的动物源性干酪乳杆菌中，经培养诱导表达，超声波裂解，SDS-PAGE检测到E2蛋白目的条带，表明成功获得LV-pNZ44-E2重组乳酸菌工程菌;经免疫荧光抗体染色，能在重组菌菌体内见到特异性免疫荧光，而非重组菌菌体内没有荧光，说明E2蛋白能在乳酸菌表达并具有良好的生物学活性。rn 将筛选到的优良重组乳酸菌作为益生菌，经口服免疫实验动物家兔;从实验动物粪便中能分离到重组乳酸菌及用PCR检测到目的基因，表明该重组工程菌能在动物肠道内定植存活。采取血清用ELISA进行特异性抗体检测，ELISA检测实验动物的血清阻断率大于40%,判定为阳性，说明有免疫动物中有猪瘟抗体存在。采抗凝全血进行淋巴细胞增殖实验，猪瘟病毒抗原对实验动物的淋巴细胞有明显的刺激增殖作用，表明口服重组干酪乳杆菌后既可引发机体的体液免疫，也可引发细胞免疫应答。