猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的纯化及免疫原性研究

摘要

本研究将构建的原核表达载体pET-ApxⅡ在大肠杆菌BL21中进行原核表达。表达产物以包涵体的形式存在,包涵体进过洗涤后通过亲和层析进行纯化,然后纯化后的蛋白进行Western-bloting检测分析。将100只小鼠随机分为5组,血清1型全菌灭活苗组,血清7型全菌灭活苗组,ApxⅡA蛋白免疫组,血清7型灭活苗+ ApxⅡA蛋白免疫组以及PBS对照组。每次免疫后一周,利用毒素Ⅱ建立的ELISA进行抗体的检测,第三次免疫后一周,用浓度分别为1.0×106CUF/ml和1.5×106CUF/ml的1型和7型菌株进行攻毒。结果显示:单独ApxⅡA蛋白免疫的小鼠对血清1型攻击的保护率为60％,对血清7型的保护率为50％,对同种血清型和异种血清型都有一定的免疫保护力;而血清7型灭活苗+ApxⅡA蛋白免疫组的保护率分别为70％和90％,表明ApxⅡA蛋白在一定程度内能够增强灭活苗的免疫效果。本研究为猪传染性胸膜肺炎高效疫苗的研究奠定了基础。