三个猪戊型肝炎病毒ORF2基因连续片段核酸疫苗的构建

摘要

为了研制猪戊型肝炎(HE)基因工程疫苗,在由猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2N端及中间部分三个连续基因片段B1、B2、B3所构建的原核表达质粒pET32a-B1、pET32a-B2、pET32a-B3的基础上,设计引物扩增基因片段LB1、LB2、LB3,分别与真核表达载体pEASY-M1 Expression Vector直接进行T-A连接,构建得到重组真核表达质粒pEASY-a、pEASY-b、pEASY-c.将真核表达质粒pEASY-a、pEASY-b、pEASY-c分别转染293T细胞,经实时荧光定量RT-PCR检测目的基因,证实这三个真核表达质粒可转染293T细胞表达目的蛋白。经SDS-PAGE电泳分析、Western Blot鉴定,结果表明真核表达质粒pEASY-a、pEASY-b、pEASY-c在转染293T细胞中表达的目的蛋白具有良好的HEV抗原性。从而获得了三个HEV ORF2连续片段的候选核酸疫苗,为今后进一步深入研究奠定了基础。