荧光定量PCR技术检测副溶血弧菌方法的建立与初步应用

摘要

根据副溶血弧菌(VP)的toxR基因序列,应用primer6.0设计了1对特异性引物,建立了副溶血弧菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,进行了标准曲线的建立,并对所建立方法进行了特异性和灵敏度测试。结果表明所建立的荧光定量PCR扩增效率E=100％,R2=0.996,最低检出量为2.14个拷贝;该方法仅能检出副溶血弧菌,而不能检测出溶藻弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌、沙门氏菌、枸橼酸杆菌没有交叉反应,具有很好的特异性。并且将结果与普通PCR进行比较,发现同条件下本方法的灵敏度比普通PCR高10倍。经临床检测,从100份进口冷冻带鱼、鱿鱼和墨鱼等中检出3份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法符合率100％。表明已成功建立了特异灵敏的副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法。本试验方法的建立对于加强进出口水产品中VP的检验检疫具有十分重要的意义。