鸭AdipoR1基因3'UTR区的扩增及真核表达载体的构建

摘要

本文通过对鸭的试验研究，运用套式PCR成功克隆了鸭AdipoRl基因3'UTR区片段，并连接至真核表达载体p1RES2-EGFP上，经In-ner preimer PCR和酶切鉴定，并测序发现突变位点。用Lipofectamine 2000转染效率地将质粒p1RES2-EGFP-AdipoRl-3'UTR转染至C2C12细胞中，24h后荧光显微镜下能够观察到清晰的绿色荧光蛋白的表达。AdipoRs介导脂联素参与脂质代谢、糖类代谢，主要涉及腺昔酸活化激酶(AMPK)、乙酞CoA梭化酶(ACC)、促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和过氧化物酶体增殖物活化受体a(PPAR-a)等多个细胞内信号通路。AdipoRs被脂联素激活后与APPLl的接头蛋白质相接触，促进骨骼肌对葡萄糖的摄取和脂肪酸氧化。脂联素主要由脂肪细胞分泌且是唯一与脂肪累积呈负相关的细胞因子，在AdipoRl主要介导球形脂联素，发挥生物学功能。