BCB染色液对绵羊不同直径卵泡卵母细胞的筛选作用

摘要

本试验以屠宰场绵羊卵巢为材料，采用抽吸法收集卵泡直径小于2mm、2-5mm、大于5mm卵母细胞，置于26μM/L的BCB染色液中避光染色90min，将卵母细胞质呈蓝色的设为BCB十卵母细胞，未着色的设为BCB+卵母细胞，体外成熟24h，用0.1%透明质酸酶去除卵丘细胞，再用含5μM/L离子霉素的激活液中激活4min，然后移入含6-DMAP的培养液内培养2h，最后，移入含有600-700μM/L体外培养液的四孔培养板中培养。取第7d的囊胚，进行囊胚Hoechst细胞染色，然后在倒置显微镜的紫外光下进行细胞计数。研究表明：小于2mm组卵母细胞可能由于体内某种物质储备不足，核成熟可以达到，但后期胚胎的发育能力会受到限制，大于5mm卵泡直径的卵母细胞，受精卵基本都能发育到桑胚或囊胚。通过卵泡直径的分类和BCB染色法的结合，可以有效筛选出卵泡直径大于2mm卵母细胞适合体外培养，并且大于2mmBCB+组卵母细胞后期发育潜能更强。