boFcγRⅡ线性配体结合表位鉴定

摘要

牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)与人FcγRⅡ (CD32)同源,胞外区含有2个Ig样结构域,为牛IgG的低亲和力受体,特异亲和牛IgG1但不结合牛IgG2.为在细胞表面表达受体分子,将boFcγRⅡ编码区cDNA亚克隆到表达载体pcDNA3,转染COS-7细胞,通过G418抗性筛选和连续克隆化,获得了在COS-7细胞表面稳定表达受体分子的boFcγRⅡ转染细胞株,其IgG1-RBC玫瑰花环形成率达90％左右,为boFcγRⅡ的功能研究提供了良好的技术平台.将boFcγRⅡ胞外区cDNA亚克隆到表达载体pcDNA3,转染NS0细胞,利用G418抗性细胞诱生小鼠腹水,以镍螯合层析纯化boFcγRⅡ分泌蛋白,该重组蛋白特异结合牛IgG1.为鉴定boFcγRⅡ的线性配体结合表位,在EC2结构域设计合成boFcγRⅡ多肽,Dot-blot分析表明boFcγRⅡ的122-131位多肽FYQDRKSKIF是特异结合牛IgG1的最短有效多肽,为boFcγRⅡ的线性配体结合表位,位于受体EC2结构域C-C'环;多肽突变结果显示,以Ala置换Phe122、Tyr123、Arg126、Lys127、Ser128、Lys129或Phe131均导致boFcγRⅡ线性配体结合表位多肽丧失结合牛IgG1活性,提示boFcγRⅡ 线性配体结合表位的上述氨基酸残基为结合牛IgG1的所必需.