褐藻胶寡糖对H2O2诱导的H9C2心肌细胞衰老的影响

摘要

目的:研究褐藻胶寡糖(alginate oligosaccharide,AOS)对H2O2诱导的H9C2心肌细胞衰老的影响. 方法:应用不同浓度H2O2(30μM、50μM、100μM、150μM、200μM)干预H9C2心肌细胞,4h后更换新鲜培养基,继续培养48h后应用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色试剂盒检测心肌细胞衰老情况,同时应用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,明确不引起凋亡的最大H2O2浓度诱导心肌细胞衰老.应用SA-β-gal染色检测褐藻胶寡糖M-3K、G-3K、M5、G5对H2O2诱导的心肌细胞衰老的影响，并进一步应用DHE超氧化物阴离子荧光探针和MDA检测试剂盒明确AOS对H202诱导的心肌细胞中ROS产生以及心肌细胞上清液中MDA含量的影响。 结果：H202呈浓度依赖性诱导心肌细胞衰老，我们采用不引起凋亡的最大H2O2浓度(100μM)，以达到最好的诱导心肌细胞衰老的效果。SA-β-gal染色结果显示褐藻胶寡糖M-3K (100yg/ml)、G-3K (100μg/ml)、M5( 50μg/ml、100μg/ml)、G5 (50μg/ml、100μg/ml)可以显著降低H202诱导的心肌细胞衰老数目，并且褐藻胶寡糖单体(M5、G5)显示出更好的效果。DHE超氧化物阴离子荧光探针结果显示，H207干预导致心肌细胞中ROS产生增多(6.58±1.108 fold over Control)，褐藻胶寡糖M-3K、G-3K、M5、G5均显著减少H2O2诱导心肌细胞中ROS的产生(3.00±1.007、2.78±0.952、2.12±0.879、2.22±0.712fold over Control)．并且褐藻胶寡糖单体显示出更好的效果。MDA检测结果显不，H2O2干预导致心肌细胞上清液中MDA含量明显增加(3.35±0.632 nmol/ml)，褐藻胶寡糖M-3K、G-3K、M5、G5均显著减少H2O2诱导的心肌细胞上清液中的MDA含量(1.95±0.662、1.77±0.461、1.60±0.388、1.52±0.374 nmol/ml)。 结论：AOS显著抑制H2O2诱导的H9C2心肌细胞衰老，其机制可能与抑制心肌细胞氧化应激水平有关。